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服務(wù)詳情

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木聚糖酶(檢測服務(wù))

木聚糖酶能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下可以與3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑發(fā)生顯色反應(yīng)。反應(yīng)液顏色的深度與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,而還原糖的生成量又與反應(yīng)液中木聚糖酶的活力成正比。因此,通過測定反應(yīng)液顏色的強度,可以計算反應(yīng)液中木聚糖酶的活力。

價格:¥20.00

規(guī)格:反應(yīng)

貨號:ST1470

品牌:LEAGENE

 服務(wù)介紹:

        木聚糖酶能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下可以與3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑發(fā)生顯色反應(yīng)。反應(yīng)液顏色的深度與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,而還原糖的生成量又與反應(yīng)液中木聚糖酶的活力成正比。因此,通過測定反應(yīng)液顏色的強度,可以計算反應(yīng)液中木聚糖酶的活力。

貨號

名稱

規(guī)格

價格

ST1470

木聚糖酶檢測試劑

反應(yīng)

20

實驗流程:

1、準備樣品:

①固體樣品稱取試樣兩份,精確至0.001 g。 加入4ml Assay buffer,充分溶解,并定容至10 ml,在4 °C條件下避光保存1~2h。1000g離心3~5min,取上清液,再用Assay buffer做適當稀釋、定容(稀釋后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在0.04~0.10U/ml之間)。

②液體樣品可以直接用Assay buffer稀釋、定容(稀釋后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在 0.04~0.10 U/ml之間)

2、配制木聚糖溶液:準確稱取0.15g 木聚糖,使充分溶解于8ml去離子和5ml NH水溶液(3×)中,通過pH計測定,用YS溶液調(diào)節(jié)pH至5.5~5.6,補水至15ml

2、配制NH水溶液(1×):取1份NH水溶液(3×)和2份去離子水混合即成。

3、標準曲線繪制:取8支離心管按下表設(shè)置,準確吸取木糖標準(10mg/ml)與Assay buffer,即得不同濃度的木糖梯度標準。

加入物(ml)

1

2

3

4

5

6

7

木糖標準(10mg/ml)

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

Assay   buffer

0.99

0.98

0.97

0.96

0.95

0.94

0.93

木糖標準(mg/ml)

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

取1支離心管,加入0.08mlAssay buffer和0.1mlDNS試劑,混勻,沸水浴加熱5min,自來水冷卻至室溫,加NH水溶液(1×)0.32ml,即為空白管。另取7支離心管,加入0.04ml 37℃預(yù)熱的Assay buffer、0.04ml木糖梯度標準和0.1mlDNS試劑,混勻,沸水浴加熱5min,自來水冷卻至室溫,加NH水溶液(1×)0.32ml,即為標準管。以空白管調(diào)零,酶標儀測定540nm處各管的吸光度。

測定樣品

①取適量的木聚糖溶液和酶提取液置于不同的離心管中,37°C 平衡 20 min;木聚糖溶液使用之前應(yīng)充分搖勻。

②取2支離心管按下表設(shè)置依次加入相應(yīng)試劑:

加入物(ml)

對照管

測定管

酶提取液

0.04

0.04

Assay buffer

0.04

-

木聚糖溶液

-

0.04

37℃水浴30min

DNS試劑

0.1

0.1

立即搖勻,放入沸水浴中顯色5min,

立即取出,流水冷卻至室溫,加 NH水溶液(1×)0.32ml

 以空白管調(diào)零,酶標儀測定540nm處對照管和測定管的吸光度(分別記為A1、A0)。

實驗結(jié)果:

全自動生化儀檢測后導(dǎo)出結(jié)果,結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運輸要求:

1、動植物組織樣本(干冰運輸)

準確稱取動物組織重量按重量(mg):體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水),冰水浴條件下,機械勻漿,制備成10%的勻漿液,2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘,離心10分鐘,取上清液進行測定。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜(GLU檢測請勿全血樣本放置過夜取血清)后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min,取上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心,然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運輸)

可用肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min,取上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心,然后檢測。

4、細胞樣本

貼壁細胞:將細胞用PBS沖洗2次后,用細胞刮將細胞小心刮下來,將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細胞沉淀,干冰運輸。

懸浮細胞:將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細胞沉淀,干冰運輸。

細胞上清:標本于2-8℃,3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清,上清立即用于實驗,或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。

僅供科研用途,不可用于臨床診斷!